正在及时荧光定量PCR(qPCR)测验中,当双链DNA受热时,其互补碱基之间的氢键会逐步断裂,导致双链阔别成两条单链,这一经过被称为DNA的“溶解”。总的DNA双螺旋组织降解一半的温度称为溶解温度(Tm),分歧序列的DNA,GC含量和散布分歧,Tm值也分歧。跟着温度的升高,DNA的荧光强度会发作变动,通过监测这种变动,绘造出的图即为DNA的
高分别率熔解弧线HRM是一种基于单核苷酸溶解温度分歧而造成分歧样子溶解弧线的基因分解新本事,拥有极高的敏锐性,可能检测出单个碱基的分歧,而且本钱低、通量高、速率疾、结果确凿、不受检测位点的限度,告终了真正的闭管操作。其道理是通过PCR扩增取得洪量标的序列,然后直接对其运转高分别率溶解序次,正在温度升高经过中,双链DNA逐步解链,嵌入DNA双链中的染料(SYBR Green I等)也随之零落,荧光信号削弱,直至双链DNA所有解链,荧光信号削弱至最低,通过监测这一经过来分解DNA序列。
HRM本事正在医学范畴有着平常的使用。比如,正在高血压患者中筛查MTHFR基因多态性,通过HRM本事可能迅速、确凿地检测MTHFR C667T多态性,从而帮帮诊断H型高血压。另表,HRM本事还使用于单基因遗传病诊断和产前诊断,如筛查非缺失型α+-地中海血亏Hb Quong Sze,作战了一种迅速、简单、低价的分子筛查手法。正在肿瘤分子检测中,HRM本事与测序本事相勾结,升高了检测确切凿性和本钱效益。
染料法固然便当赶紧但不拥有特异性。染料能与完全双链 DNA 勾结,即使是正在高分别率溶解弧线,同样不行定位基因突变的具置。为了满意精准定位的的需求,探针溶解弧线本事正正在飞速繁荣,该本事行使荧光探针取代染料与主意基因相勾结,分解探针与主意片断的解链温度,即可到达基因分型的主意。正在多色探针熔解弧线本事中,DNA分子会正在分歧的温度下发生分歧“溶解峰”,每个峰对应一段DNA序列的熔化。通过分解这些峰的数目、处所和体式等音信,可能确凿确切定DNA序列的构成、杂交强度、配对安谧性等音信。此表,探针可采用分歧波长的荧光标帜,充盈行使荧光 PCR 仪的多个通道,告终多基因多位点的并行性检测。
比如,厦门致善的MeltArray”的荧光PCR新本事,宏微特斯的 EMPA 本事以及韩国 Seegene 公司的 TOCE 本事等。